第452章 难道不允许我偷偷努力,然后惊艳所有人吗?
陆时羡闻言一笑,透露出一丝神秘的气息:“说出来就没意思了,你们可以猜猜看。”
几人你看看我,我看看你,眼中都是好奇和探究。
对他话里的真实性倒是一点没有怀疑。
因为他们对陆时羡的信任,早已经在长时间的相处中得到了多次验证。
时间紧急,任务繁重。
几个人心里都清楚接下来的时间可能不会轻松了。
但也都做好了苦战得心理准备。
做科研不耐得了寂寞是不行的。
不过陆时羡发现一向显得理智的梅林此时居然显得有些亢奋。
他好笑地摇摇头,忽然想到一句话:“如果没有旺盛的好奇心和纯粹的求知欲为动力,就不可能产生那些对人类和社会具有巨大价值的发明创造。”
在这个角度上,他认为梅林和他是一路人。
没有多余的寒暄,也没有多余的解释。
四人默契地回到实验室。
陆时羡站在操作台前直入主题。
“接下来,可能大家要辛苦一点,将所有测序的准备工作做好,然后所有的测序流程由我来操作。”
“梅林、瑟琳和鲍勃你们分别负责dna提取、文库构建和引物连接的预处理操作。”
“这个工作结束之后,你们可以看我的操作,有什么不懂的都可以问我。”
闻言,三人皆是点头,没有异议。
这个安排和他们预想的差不太多。
只不过就是测序仪只有一台,又只有陆时羡一个人操作。
相较于预处理,陆时羡的工作就显得更繁复。
三代测序技术其实也就是单分子测序技术,它能够直接读取单dna分子的序列信息,从而规避掉pcr扩增和文库扩增带来的风险。
但没有完美的技术,这项技术区别于高通量测序技术的缺点是测序信息量大且非常复杂,在测序过程中对精力的消耗是很大的。
三人仿佛已经看见陆时羡即将爆肝的样子,心中都是对他发际线的怜悯。
但他们对陆时羡的想法一无所知。
接下来,几人都陷入了紧张而有序的忙碌之中。
预处理看似只是测序的基础,但也不是随便来个人就能做的。
他们这台测序仪运用的是smrt测序技术,它是利用dna多聚酶在放射线观测下合成dna,从而观察到dna的添加情况,以此得到dna的序列信息。
文库制备是预处理工作中最复杂的一环,需要对基因组的dna进行片段化的末端修复。
这个操作类似于进行最精密的手术,需要将发夹式的接头连接到双链dna分子两端,然后形成一个封闭的圆圈。
再将引物和聚合酶退火到接头上,最后就能形成一个哑铃状的待测序文库。
光是这个流程就耽误了三四天的时间。
三个人经过现学,然后依次进行了操作。
最后的结果让陆时羡很是意外。
在这种精细实验操作上,鲍勃的表现居然比作为女生的瑟琳还要好。
综合制备时间和效果,他得到的文库经过查验之后标准程度比较高。
虽然和陆时羡亲手制备的还比不了,但用来进行测序已经是基本满足要求了。
看着几人都是诧异地望着自己,鲍勃虽然也很意外,但在脸上毫无显现,然后骄傲地抬起头。
“看什么?”
“难道不允许我偷偷努力,然后惊艳所有人吗?”
不过,都是朝夕相处的队友,彼此什么习惯和水平都清楚。
估计是瞎猫碰上死耗子,但梅林和瑟琳没好意思去打击他。
“我假装信了。”陆时羡嘴上说着,心中还是比较开心的。
一个团队如果一直只靠固定的那么几个人,是不会存在太久的。
一个人的精力和时间是有限的,而探索无边宇宙和世界奥秘的事业却是无限的。
这也就注定单打独斗是走不远的。
有人能够站出来,分担一下他的压力,陆时羡感到有些欣慰。
“很好,那么文库制备这块工作就由鲍勃来负责,梅林你和瑟琳在完成其他步骤之后进行协助就好了。”
接下来的几天,经过不断的磨合。
这个四人小团队才逐渐走入了正轨。
没办法,和陆时羡这种以前熟练掌握过的不一样,在这项技术上,三人几乎是从头开始学习。
而且就这还只是前置准备工作,就几乎花费了一个星期的时间。
“你们之前已经知道在片段化操作中,这个过程是随机的,因此可能会出现平齐的末端,也有可能出现不平的末端,因此要进行末端修复,将产生的所有的3'或5'突出黏性末端转化成平末端。”陆时羡正解答着来自鲍勃的问题,
经过对新技术的不断上手操作,再结合他以前的实验经历,彼此碰撞之下,鲍勃产生了一些疑惑。
他的问题是:“末端修复加a碱基很好理解,是为了产生粘性末端,但进行接头连接全过程都要用到t4dna聚合酶,让他有些不解。
这个问题比较基础,只能说鲍勃之前没有留意聚合酶的各种作用。
但陆时羡也没不耐烦,认真的回答道:“那是因为t4dna聚合酶全程都在起作用,它的原理是不仅能够从5'至3'方向催化合成dna,补平5'突出末端,也具有3'至5'外切酶活性,帮助对3'突出末端进行切平,最后将黏性末端dna片段转变为平末端dna。”
紧接着,梅林也贡献了一个问题。
他颇为疑惑地问道:“我们的样本里面含有的rna中最多的是rrna,如果直接对最后得到的rna文库进行测序,那么数据里面可能会存在rrna的测序数据,这个数据我怕会有一些误差啊?”
陆时羡不断在心中点头。
梅林能想到这一点,足以见到他思维的连贯性。
没办法,这个问题确实问的很关键,几乎决定了测序工作成功与否。
而他之前都没有主动提及这一环,是想着自己亲自上手处理时候在说一下的。
但现在既然有人说到这,提前一下也不是不行。
事实上,梅林的判断还是有些保守了。
请收藏本站:https://www.fkshu.cc。疯狂小说网手机版:https://m.fkshu.cc
几人你看看我,我看看你,眼中都是好奇和探究。
对他话里的真实性倒是一点没有怀疑。
因为他们对陆时羡的信任,早已经在长时间的相处中得到了多次验证。
时间紧急,任务繁重。
几个人心里都清楚接下来的时间可能不会轻松了。
但也都做好了苦战得心理准备。
做科研不耐得了寂寞是不行的。
不过陆时羡发现一向显得理智的梅林此时居然显得有些亢奋。
他好笑地摇摇头,忽然想到一句话:“如果没有旺盛的好奇心和纯粹的求知欲为动力,就不可能产生那些对人类和社会具有巨大价值的发明创造。”
在这个角度上,他认为梅林和他是一路人。
没有多余的寒暄,也没有多余的解释。
四人默契地回到实验室。
陆时羡站在操作台前直入主题。
“接下来,可能大家要辛苦一点,将所有测序的准备工作做好,然后所有的测序流程由我来操作。”
“梅林、瑟琳和鲍勃你们分别负责dna提取、文库构建和引物连接的预处理操作。”
“这个工作结束之后,你们可以看我的操作,有什么不懂的都可以问我。”
闻言,三人皆是点头,没有异议。
这个安排和他们预想的差不太多。
只不过就是测序仪只有一台,又只有陆时羡一个人操作。
相较于预处理,陆时羡的工作就显得更繁复。
三代测序技术其实也就是单分子测序技术,它能够直接读取单dna分子的序列信息,从而规避掉pcr扩增和文库扩增带来的风险。
但没有完美的技术,这项技术区别于高通量测序技术的缺点是测序信息量大且非常复杂,在测序过程中对精力的消耗是很大的。
三人仿佛已经看见陆时羡即将爆肝的样子,心中都是对他发际线的怜悯。
但他们对陆时羡的想法一无所知。
接下来,几人都陷入了紧张而有序的忙碌之中。
预处理看似只是测序的基础,但也不是随便来个人就能做的。
他们这台测序仪运用的是smrt测序技术,它是利用dna多聚酶在放射线观测下合成dna,从而观察到dna的添加情况,以此得到dna的序列信息。
文库制备是预处理工作中最复杂的一环,需要对基因组的dna进行片段化的末端修复。
这个操作类似于进行最精密的手术,需要将发夹式的接头连接到双链dna分子两端,然后形成一个封闭的圆圈。
再将引物和聚合酶退火到接头上,最后就能形成一个哑铃状的待测序文库。
光是这个流程就耽误了三四天的时间。
三个人经过现学,然后依次进行了操作。
最后的结果让陆时羡很是意外。
在这种精细实验操作上,鲍勃的表现居然比作为女生的瑟琳还要好。
综合制备时间和效果,他得到的文库经过查验之后标准程度比较高。
虽然和陆时羡亲手制备的还比不了,但用来进行测序已经是基本满足要求了。
看着几人都是诧异地望着自己,鲍勃虽然也很意外,但在脸上毫无显现,然后骄傲地抬起头。
“看什么?”
“难道不允许我偷偷努力,然后惊艳所有人吗?”
不过,都是朝夕相处的队友,彼此什么习惯和水平都清楚。
估计是瞎猫碰上死耗子,但梅林和瑟琳没好意思去打击他。
“我假装信了。”陆时羡嘴上说着,心中还是比较开心的。
一个团队如果一直只靠固定的那么几个人,是不会存在太久的。
一个人的精力和时间是有限的,而探索无边宇宙和世界奥秘的事业却是无限的。
这也就注定单打独斗是走不远的。
有人能够站出来,分担一下他的压力,陆时羡感到有些欣慰。
“很好,那么文库制备这块工作就由鲍勃来负责,梅林你和瑟琳在完成其他步骤之后进行协助就好了。”
接下来的几天,经过不断的磨合。
这个四人小团队才逐渐走入了正轨。
没办法,和陆时羡这种以前熟练掌握过的不一样,在这项技术上,三人几乎是从头开始学习。
而且就这还只是前置准备工作,就几乎花费了一个星期的时间。
“你们之前已经知道在片段化操作中,这个过程是随机的,因此可能会出现平齐的末端,也有可能出现不平的末端,因此要进行末端修复,将产生的所有的3'或5'突出黏性末端转化成平末端。”陆时羡正解答着来自鲍勃的问题,
经过对新技术的不断上手操作,再结合他以前的实验经历,彼此碰撞之下,鲍勃产生了一些疑惑。
他的问题是:“末端修复加a碱基很好理解,是为了产生粘性末端,但进行接头连接全过程都要用到t4dna聚合酶,让他有些不解。
这个问题比较基础,只能说鲍勃之前没有留意聚合酶的各种作用。
但陆时羡也没不耐烦,认真的回答道:“那是因为t4dna聚合酶全程都在起作用,它的原理是不仅能够从5'至3'方向催化合成dna,补平5'突出末端,也具有3'至5'外切酶活性,帮助对3'突出末端进行切平,最后将黏性末端dna片段转变为平末端dna。”
紧接着,梅林也贡献了一个问题。
他颇为疑惑地问道:“我们的样本里面含有的rna中最多的是rrna,如果直接对最后得到的rna文库进行测序,那么数据里面可能会存在rrna的测序数据,这个数据我怕会有一些误差啊?”
陆时羡不断在心中点头。
梅林能想到这一点,足以见到他思维的连贯性。
没办法,这个问题确实问的很关键,几乎决定了测序工作成功与否。
而他之前都没有主动提及这一环,是想着自己亲自上手处理时候在说一下的。
但现在既然有人说到这,提前一下也不是不行。
事实上,梅林的判断还是有些保守了。
请收藏本站:https://www.fkshu.cc。疯狂小说网手机版:https://m.fkshu.cc